Hygienic behavior 청소행동, 위생활동

*역주 - 미국 꿀벌 연구소에서 제안한 VSH선별방법은 실제 적용하기에는 제한적인면이 많이 있습니다. 첫째 기준이 되는 표본(일정수치로 감염된 보라색눈 단계의 봉판)을 구하는 것은 별도의 감염 봉군을 양성해야 가능합니다. 둘째, 실제 양봉가들이 현미경을 보유하고 봉판 검사를 위해 많은 시간을 투자해야합니다.

아래 소개하는 방법중;

'가' 냉동사멸의 경우 많이 쓰는 방법이고 비교적 정확한 방법이나 섭씨 영하 20도 동결하는 냉동고가 필요합니다. 미국의 경우 집집마다 별도의 냉동고(약 400달러 전후)가 있어서 문제가 되지 않으나 한국의 가정용 냉장고는 이 온도까지 내릴 수 없습니다. 지마켓 같은 곳에 검색하면 초저온 냉장고가 있습니다. 영하 20도에서 30도정도 되는 것으로 선택하면 될 것 같습니다.  또한, 소비장의 파손이 불가피합니다.

'나' 액체질소사멸은 정확도가 높으나 액체 질소를 구하고 보관하며 다루어야 하는 위험이 있습니다. 액체질소(N2)는 국내의 경우 농촌지도소 같은 곳을 접촉하면 구할 수 있을 같습니다. 주로 가축의 인공수정을 위해 종자의 정액 및 난자 내동보관에 사용하기 때문입니다. 보호장구의 경우 지마켓에서 '액체질소'로 검색하면 장갑, 보관통, 신발, 앞치마 등이 나옵니다. 보호장갑은 필수 입니다. 자칫 피부가 액체질소에 닫는 순간 동상에 걸려 괴사하게 됩니다. 

'다'의 경우 전체 봉군에 대한 표준치를 구하는 것으로 매우 실용적인 방법으로 유럽에서 표준으로 사용하고 있습니다. 다만 실험데이터의 표준편차 확인 및 이에 따른 실험 시간을 잘 조절해야만 의미 있는 자료를 확보할 수 있습니다.

---이하 번역 자료--- 

청소행동(위생활동)은 봉아질병(Brood diseases), 미국부저병(AFB) 및 백묵병(chalkbrood) 그리고 바로아 진드기 (Boecking 와 Spivak, 1999, Evans 와 Spivak, 2010, Spivak 와 Reuter, 2001, Wilson-Rich 외., 2009)에 대한 자연 멸균 방제로 간주된다. 따라서 이러한 병원균과 기생충에 대하여 저항성을 갖는 육종 프로그램과 관련이 있다. 청소행동을 시험하기 위한 표준화된 방법은 동결사멸 (Momot 와 Rothenbuhler, 1971; Spivak 와 Reuter, 1998) 또는 바늘사멸 (Nutton 와 Ostasiewski, 1986)된 번데기의 제거를 기준으로 한다. 더욱이 Harbo 와 Harris (2005)는 진드기감지행동 (VSH)라고 불리는, 새끼 벌방에서 진드기 번식에의해 발생된 특별한 청소행위를 확인하는 방법을 기술하였다. 표 7 에 자세한 정보가 있다.

액체 질소로 번데기판을 동결시키는 것은 봉판을 절단, 삽입, 냉동 및 교체하는 것보다 봉판에 더 효율적이며 덜 파괴적이다.

표 7. 봉군에 의해 표시된 청소행동(위생행동)의 수준을 결정하는 방법. *동결사멸 분석법에 근거하여 청소행동(위생행동)으로 간주되는 봉군, 즉 24 시간 이내에 동결번데기판(100개의 벌방)의 95 % 이상을 제거하는 봉군은 군세나 식량에 관계없이 분석 결과간에 매우 높은 일관성을 나타낸다 .

가.  동결사멸봉판 분석법: 잘라낸 봉판을 동결

1.     보라색 눈 단계의 번데기봉판에서 각면 (5 x 6cm)에 약 100 개의 벌방이 포함되게 일부분을 잘라내어 -20 ℃에서 24 시간 동안 동결시킨다.

2.     냉동 번데기판을 시험 대상 봉군에 넣어준다 (그림 14). 절단 동결된 봉판을 같은 봉군에 넣는지 다른 봉군에 넣는지는 문제가 되지 않는다 (Spivak and Downey, 1998).

3.     24 시간 이내에 번데기봉판을 제거한다.

4.     개방된 벌방의 수를 기록한다. 또한, 부분적으로 또는 완전히 개방되지 않은 벌방의 수 및 아직 벌방으로부터 완전히 제거되지 않은 죽은 번데기 수를 기록 한다.

5.     시험은 동일한 봉군에서 적어도 두 번 반복시행 한다.

6.     청소활동 봉군은 두 번의 시험에서 24 시간 내에 동결된 번데기의 95 % 이상 봉개를 개방하고 번데기를 완전히 제거 해야 한다. 이것은 육종 목적으로 사용되어야 하는 청소행동에 대한 가장 보수적인 (엄격한) 평가법이다.

7.     덜 보수적인 청소행위는 24 시간 후에 완전히 제거된 동결 번데기 수를 도합 계산한다.

그림 14. 동결사멸봉판시험 : 봉판을 잘라 동결. 왼쪽 : 봉인된 새끼의 냉동된 부분을 조심스럽게 뚫린 봉판 구멍에 넣는다. 오른쪽 : 봉군으로 돌아온 후 24 시간이 지나면, 동결사멸된 번데기의 제거된 양을 기록한다. 사진 : M Spivak.

나.  동결사멸봉판 분석법: 액체 질소를 사용하여 봉판의 일부 동결

( *보호구 착용 필수 )

1.     액체 질소는 적절한 탱크 (예 : Dewar 탱크)에 보관해야 하며 액체 질소를 취급 할 때는 장갑을 사용해야 한다 (그림 15)

2.     액체 질소를 봉판에 직접 붓도록 직경 75mm 원통을 만든다(역주, 맥주캔을 잘라서 쓰면 된다). 금속관 또는 PVC관을 사용할 수 있다. 더 넓은 관은 주변부의 빈 벌방으로 질소가 새는 것을 줄여다. 원통의 길이는 최소 100 mm 이상이어야한다.

3.     동결시킬 봉판으로 보라색 눈동자 단계의 봉인된 번데기판을 찾는다.

4.     지지대 (예 : 빈 벌통)를 가로 질러 봉판을 수평으로 놓는다. 봉판 중앙부에 원통을 비틀어 눌러 봉판안으로 들어가 밀착 되게 한다.

5.     원통 내부에 봉인되지 않은 셀의 수를 기록한다.

6.     원통에 300-400 ml의 액체 질소를 붓는다. 액체 질소가 적으면 동결이 되지 않을 수 있다. 300ml 이상의 스치로폼 (커피) 컵을 사용하여 계량하고 붓는다. 먼저 튜브에 약 5 mm의 액체 질소를 붓는다. 이것이 증발 할 때 나머지를 봇는다.

7.     액체 질소가 증발하고 원통을 제거하기 전에 원통이 녹을 때까지 기다린다 (10 분 이상 걸릴 수 있음).

8.     시험 봉군에 동결봉판을 24 시간 동안 넣어둔다.

9.     시험은 같은 봉군에서 적어도 두 번 반복해야 한다.

10.   청소활동 봉군은 두 번의 시험에서 24 시간 내에 동결된 번데기의 95 % 이상의 봉개를 제거하고 번데기를 완전히 제거 해야 한다. 이것이 육종 목적으로 사용되는 청소행동(위생행동)에 대한 가장 보수적인(엄격한) 분석법이다.

11.   덜 보수적인 청소행동 (위생행동) 판별법은 24시간 후에 완전히 제거된 동결 번데기 수와 그 과정에 있는 번데기 수를 합산하는 것이다.

전통적으로, 48 시간 이내에 동결사멸한 번데기를 제거한 봉군은 청소활동(위생종)종으로 간주되었으며, 1 주일 이상 걸리면 그렇지 않은 것으로 간주되었다 (Gilliam et al., 1983). 그러나 24 시간 내에 동결사멸된 번데기를 제거 하는 것이 질병 저항성과 더 깊은 관련성이 있다 (Spivak, 미공개 자료. 역주 – 발표된 몇 개의 논문이 있음).

그림 15. 동결사면봉판 분석법: 액체 질소를 사용하여 봉판 안에 번데기들을 동결 시킴. 왼쪽 : 액체 질소를 배출하는 밸브가 달린 Dewar 탱크, PVC 원통 (봉판 위의 검은 원통)에 액체 질소를 붓기위한 스치로폼 컵. 오른쪽 : 24 시간이 지난 후, 청소활동(위생) 봉군이 동결사명된 번데기의 95 % 이상을 제거했다. 사진 : M Spivak.

바늘 시험 방법은 유럽에서 현장 선종 프로그램의 표준으로 권장되는데, 이는 진드기 감염된 번데기의 제거와 중요한 상관 관계를 나타내며 표준화가 가능하고 양봉가가 쉽게 수행 할 수 ​​있기 때문이다. 진드기내성(varroa tolerance)에 대한 육종 가치의 평가로써 바늘 시험 데이터를 포함시킨 통계 방법이 정립되었다. 바늘사멸봉판 평가절차의 경우 아래의 번호순서를 따르며 그림 16을 참고한다. 또한, 그림17은 현장에 적용되는 절차를 도식화한 것이다.

1.     10 × 10 봉판 (그림 16, 2번)내의 마름모꼴 틀을 어린 번데기를 포함하는 봉판위에 놓는다 (그림 16, 1번).

2.     왼쪽 위와 오른쪽 아래의 벌방에는 색펜 (그림 16, 3번)으로 표시한다.

3.     50 개의 봉개 벌방을 왼쪽에서 오른쪽으로 각 열을 아주 가는 바늘로 (2번 곤충채집용 핀, 역주- 길이 4cm 직경 0.45mm) 하나씩 찌른다 (그림 16, 4 번). 역주-같은 바늘 구멍에서 여러각도로 찌르는 것이 좋다.

4.     51번째 벌방은 처리된 번데기 구역을 식별하도록 색펜으로 표시한다 (그림 16, 3번).

5.     소비의 상단 막대에 표기를 하고 봉군의 원래 위치에 다시 넣어둔다.

6.     7-15 시간 후에 (모든 비교 봉군에 대해 균일 시간 적용) 제거상태를 확인한다. 아직 봉인되어 있거나 번데기가 남아있는 모든 벌방을 계수하고 이를 50에서 감산한다. 시험중에 완전하게 제거된 벌방의 비율을 기록한다.

7.     모든 시험 봉군이 일정 시간 간격 안에 번데기의 평균 50 %을 제거하면 가장 높은 평가 기준에 도달한 것이다. 따라서 벌방을 찌르고 검사하는 사이의 시간 간격은 검사 집단의 제거 반응 평균에 맞게 조정되어야 한다. 평균 제거율이 50 %보다 훨씬 낮으면, 시간 간격을 늘려서 청소행동(위생​​행동)이 높거나 낮은 봉군 사이의 차이가 더 커지게 해야 한다. 평균 제거율이 50 %보다 훨씬 높으면 추가 시험을 반복해서 더 짧은 시간 간격으로 조정해서 적용해야 한다.

8.     시험은 주육성기에 2-3 번 반복해야 한다.

그림 16. 청소행동(위생행동)을 위한 바늘사멸 시험.

그림 17. 바늘 시험 : a. 어린 번데기를 포함 한 50 개의 찌른 벌방; b. 약 8 시간으로 번데기 제거 시간을 제한하면 많은 벌방이 개방되지만 번데기는 제거되지는 않는다; c. 대부분의 모든 벌방이 완전히 제거됐다. 사진 : R Büchler.

참고자료:

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